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掃描電鏡的超低溫冷凍制樣及傳輸技術(shù)(Cryo-SEM)

來源：時間：2024-11-01 09:30:06 瀏覽：2894次

掃描電鏡的超低溫冷凍制樣及傳輸技術(shù)(Cryo-SEM)

掃描電鏡（Scanning Electron Microscope，簡稱SEM）是一種利用聚焦電子束掃描樣品表面，通過檢測二次電子或反射電子等信號來獲取樣品表面形貌信息的顯微觀察技術(shù)；然而，許多生物樣品在常溫下無法保持其原始結(jié)構(gòu)和形態(tài)；超低溫冷凍制樣及傳輸技術(shù)（Cryo-SEM）應(yīng)運而生，它允許在超低溫條件下對生物樣品進(jìn)行掃描電鏡觀察。

一、技術(shù)原理

Cryo-SEM技術(shù)的基本原理是將生物樣品快速冷凍并在低溫條件下進(jìn)行制樣和觀察，以保持樣品在接近其原始狀態(tài)下的結(jié)構(gòu)；這種技術(shù)避免了傳統(tǒng)制樣方法中由于固定、脫水、干燥等步驟導(dǎo)致的樣品變形或損傷。

二、冷凍制樣過程

1. 快速冷凍：樣品在液氮或液氦環(huán)境中快速冷凍，通常使用冷凍傳輸裝置（cryo-transfer device）實現(xiàn)；冷凍速度至關(guān)重要，需要足夠快以形成玻璃態(tài)冰，從而保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性。

2. 樣品制備：冷凍后的樣品可以進(jìn)行切割、研磨或離子束研磨等處理，以暴露出感興趣的區(qū)域。

3. 樣品安裝：將冷凍樣品安裝在特定的樣品臺上，準(zhǔn)備進(jìn)行SEM觀察。

三、Cryo-SEM系統(tǒng)構(gòu)成

1. 冷凍傳輸裝置：用于將樣品從低溫環(huán)境安全傳輸?shù)?/span>SEM樣品室，并保持樣品在低溫狀態(tài)。

2. 掃描電鏡：配備有冷凍樣品室的SEM，能夠在低溫條件下進(jìn)行樣品觀察。

3. 真空系統(tǒng)：為了保持樣品低溫和避免樣品污染，Cryo-SEM系統(tǒng)需要高真空環(huán)境。

4. 控制系統(tǒng)：用于操作冷凍傳輸裝置、SEM以及真空系統(tǒng)。

四、技術(shù)特點

1. 保持樣品原始狀態(tài)：Cryo-SEM可以在不破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的情況下觀察樣品，提供接近生命狀態(tài)的形貌信息。

2. 無需固定和脫水：冷凍制樣過程無需化學(xué)固定和脫水，減少了樣品處理步驟，降低了人為誤差。

3. 高分辨率成像：Cryo-SEM能夠提供高分辨率的二次電子圖像，清晰地展示樣品表面的微觀結(jié)構(gòu)。

4. 適用于多種樣品：Cryo-SEM不僅適用于生物樣品，還適用于含水或其他易揮發(fā)樣品的觀察。

五、應(yīng)用領(lǐng)域

1. 生物學(xué)研究：Cryo-SEM在細(xì)胞生物學(xué)、微生物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，用于觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞器、病原體等。

2. 藥物開發(fā)：在藥物輸送系統(tǒng)的設(shè)計中，Cryo-SEM可用于觀察藥物顆粒的形態(tài)和分布。

3. 食品科學(xué)：用于研究食品的微觀結(jié)構(gòu)，如冷凍食品中的冰晶形態(tài)。

4. 材料科學(xué)：Cryo-SEM可用于觀察含水量高的材料，如某些聚合物和復(fù)合材料。

六、技術(shù)進(jìn)展

1. 自動化程度提高：現(xiàn)代Cryo-SEM系統(tǒng)具備更高的自動化程度，簡化了操作流程，提高了實驗效率。

2. 冷凍技術(shù)改進(jìn)：冷凍技術(shù)的不斷進(jìn)步，如高壓冷凍，使得樣品冷凍更加均勻，減少了冰晶損傷。

3. 原位觀察：結(jié)合原位樣品處理技術(shù)，Cryo-SEM可以在觀察過程中對樣品進(jìn)行切割、研磨等操作。

七、未來發(fā)展趨勢

1. 集成更多功能：將Cryo-SEM與其他分析技術(shù)如能譜分析（EDS）、聚焦離子束（FIB）等結(jié)合，實現(xiàn)多功能的顯微分析。

2. 三維重構(gòu)：利用Cryo-SEM獲得的系列切片圖像，通過計算機(jī)輔助技術(shù)進(jìn)行三維重構(gòu)，以獲得樣品的三維結(jié)構(gòu)信息。

3. 智能化數(shù)據(jù)分析：利用機(jī)器學(xué)習(xí)和人工智能技術(shù)，自動識別和分類Cryo-SEM圖像中的結(jié)構(gòu)特征。

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